【细菌总DNA提取、凝胶电泳检测】在分子生物学研究中，细菌总DNA的提取是进行基因分析、PCR扩增及后续分子检测的基础步骤。而凝胶电泳则是验证提取DNA质量与纯度的重要手段。本实验旨在通过系统化的操作流程，成功获取高质量的细菌基因组DNA，并利用琼脂糖凝胶电泳对提取结果进行初步评估。

一、实验目的

1. 掌握细菌总DNA提取的基本原理与操作方法；

2. 熟悉凝胶电泳技术的操作流程；

3. 学会通过电泳图谱判断DNA的完整性与浓度。

二、实验材料与仪器

- 菌种：大肠杆菌（E. coli）或其他常见菌株

- 试剂：裂解液、蛋白酶K、异丙醇、乙醇、TE缓冲液、电泳缓冲液（TAE或TBE）

- 仪器：离心机、水浴锅、移液器、电泳仪、紫外分光光度计、紫外透射仪

三、实验步骤

1. 细菌培养与收集

将目标菌株接种于液体培养基中，37℃过夜培养。取适量培养液，以5000 rpm离心5分钟，弃去上清液，保留菌体沉淀。

2. DNA提取

（1）向菌体沉淀中加入适量裂解液，充分混匀，置于65℃水浴中孵育15分钟，使细胞壁破裂，释放DNA。

（2）加入蛋白酶K溶液，轻轻混匀后，继续孵育30分钟，降解蛋白质杂质。

（3）加入等体积异丙醇，轻轻颠倒混匀，静置10分钟，使DNA沉淀。

（4）离心收集沉淀，用70%乙醇洗涤两次，晾干后溶解于适量TE缓冲液中。

3. DNA浓度与纯度检测

使用紫外分光光度计测定DNA在260 nm和280 nm处的吸光度值，计算其浓度与纯度（A260/A280 ≈ 1.8为理想值）。

4. 凝胶电泳检测

（1）制备1%琼脂糖凝胶，加入核酸染料（如溴化乙锭），倒入电泳槽中，待凝固。

（2）取5 μL DNA样品与1 μL 6×上样缓冲液混合，加入凝胶孔中。

（3）接通电源，电压控制在100 V左右，电泳30–40分钟。

（4）取出凝胶，在紫外透射仪下观察DNA条带情况，记录电泳结果。

四、结果分析

若电泳结果显示清晰、单一的DNA条带，说明提取的DNA完整且无明显降解；若出现拖尾或弥散现象，则可能表示DNA质量不佳或提取过程中存在污染。

五、注意事项

- 操作过程中应避免DNA酶污染，所有器具需灭菌处理；

- 电泳时应确保电压稳定，防止DNA迁移异常；

- 实验结束后，妥善处理废液，符合实验室安全规范。

六、实验总结

本实验通过标准的细菌DNA提取方法，结合凝胶电泳检测手段，成功获得了可用于后续分子实验的高质量DNA样本。通过对实验过程的细致操作与数据分析，进一步加深了对DNA提取与检测技术的理解，为今后的分子生物学研究打下了坚实基础。