CCK-8操作说明与检测步骤

在生物实验中，细胞活性测定是一项基础且重要的工作。CCK-8试剂作为一种高效的细胞增殖和毒性检测工具，被广泛应用于科研领域。本文将详细介绍CCK-8的操作方法及检测步骤，帮助您更准确地完成实验。

首先，在使用CCK-8之前，请确保所有实验器材和试剂均处于适宜的工作状态。准备适量的培养基、细胞悬液以及标准品溶液，并将CCK-8试剂从冰箱取出，使其恢复至室温。

接下来，按照以下步骤进行操作：

1. 细胞接种：将适量的细胞悬液均匀分布于96孔板中，每孔加入约100微升。根据实验需求调整细胞密度，确保每个孔内的细胞数量适中。

2. 孵育：将接种好的细胞板放入恒温培养箱中，设定温度为37℃，CO₂浓度为5%，孵育时间通常为24小时，以便细胞贴壁生长。

3. 添加CCK-8试剂：移除培养基后，向每个孔中加入10微升的CCK-8试剂。轻轻晃动96孔板，使试剂与细胞充分混合。

4. 避光孵育：将加有CCK-8试剂的细胞板再次放入培养箱中，避光孵育1-4小时。孵育时间可根据具体实验需求适当调整。

5. 读取吸光度：使用酶标仪在450nm波长下测量各孔的吸光度值。同时，设置空白对照孔（仅含培养基和CCK-8试剂）作为参照。

6. 数据分析：通过计算样品组与对照组的吸光度比值，评估细胞的活性或毒性情况。如果需要进一步分析，可绘制标准曲线并利用线性回归法计算细胞存活率。

在整个过程中，务必注意无菌操作，避免污染。此外，为了提高实验结果的可靠性，建议重复多次实验并设置多个平行样本。

总之，CCK-8是一种简便快捷的细胞活性检测方法，其操作流程相对简单，但细节决定成败。希望以上介绍能为您顺利完成实验提供有力支持！